세균의 순수분리

세균의 순수 분리

Ⅰ. 목적

원하는 균을 순수하게 분리해내는 Streaking 방법을 연습한다.

Ⅱ. 이론 및 배경

미생물 실험에서 가장 중요한 것은 실험대상인 균이 다른 균들에 의해 오염되거나 서로 섞이지 않도록 유지, 보관하는 것이다. 그러나 아무리 주의해도 균은 눈에 보이지 않기 때문에 종종 오염될 수 있는데 이럴 때 원하는 균을 순수하게 분리해내는 방법이 스트리킹(Streaking)이다. Streaking은 멸균한 이쑤시게 또는 백금이(Loop)를 사용해서 plate 위에 균액을 단계적으로 도말해 나가는 방법이다. Streaking의 결과는 콜로니(Colony)로 관찰되는데 각각의 콜로니는 한 마리의 균이 계속 분열하여 만들어진 것이므로 유전적으로 순수할 수 밖에 없다. 균에 따라 색깔이나 모양이 다른 콜로니를 형성하기 때문에 Streaking을 하고나면 혼합 균액에서 순수한 균들을 따로 분리해 낼 수가 있다.

Ⅲ. 실험재료

시판되는 요구르트 5종류, MRS plate 5개, 백금이, 알코올램프, 인큐베이터

Ⅳ. 실험방법

* 주의: 모든 실험은 가능한 한 알코올램프 근처에서 실시하여 공중낙하하는 균의 오염을 방지한다.

         Streaking을 할 때 너무 힘을 주면 배지가 패이게 되므로 주의한다.

1. MRS Plate를 5개를 준비해서, 요구르트 제품 당 Plate 하나씩 사용한다. 밑바닥에 시료이름, 날짜, 성명을 기입한다.

2. 알코올램프에 불을 붙힌 후 백금이를 화염멸균한다.

3. MRS 배지에 멸균한 백금이를 살짝 대어 식혀준다.

4. 요구르트를 백금이로 찍어 그림의 ①과 같이 Streaking한다.

5. 백금이를 다시 멸균시키고, 식힌 뒤 ①의 끝부분과 조금 겹치도록 그림 ②와 같이 Streaking한다.

6. 백금이를 다시 멸균시키고, 식힌 뒤 ②의 끝부분과 조금 겹치도록 그림 ③와 같이 Streaking한다.

7. 배양기에 Plate를 거꾸로 집어 넣고 37℃에서 15시간 이상 배양한다.

8. 콜로니를 관찰한다. 독립적으로 자라 나온 콜로니가 순수분리된 균이다.

streaking

참고. 자라나온 균은 4℃ 냉장고에서 한 달 정도 보관이 가능합니다.

Ⅴ. 실험결과 및 고찰

image2

1. 5개의 배양된 MRS 배지를 사진을 찍는다.

2. LB배지를 이용해서 대장균도 Streaking 해보자

3. 매 단계마다 백금이는 새로 멸균하는 이유를 생각해 보자.

조상환

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